科研 小鼠Krueppel樣因子6(KLF6)檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品品牌:睿信生物 商品貨號(hào):RXW200582M

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說明書

  • 產(chǎn)品售價(jià): 2800 2000
  • 產(chǎn)品規(guī)格: 96T 48T
  • 產(chǎn)品貨期:現(xiàn)貨
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反應(yīng)種屬 小鼠
檢測(cè)范圍 125pg/ml-4000pg/ml
物理性能 試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無(wú)沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝,無(wú)破損漏氣。
用途 定量檢測(cè)血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本中小鼠Krueppel樣因子6(KLF6)的濃度。
實(shí)驗(yàn)原理 本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。在預(yù)包被抗小鼠Krueppel樣因子6(KLF6)抗體(固相抗體)的微孔酶標(biāo)板中,加入小鼠Krueppel樣因子6(KLF6)校準(zhǔn)品和待測(cè)樣本,再加入另一株HRP標(biāo)記的抗小鼠Krueppel樣因子6(KLF6)抗體(酶標(biāo)抗體),經(jīng)過溫育與充分洗滌,去除未結(jié)合的組分,在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體的夾心復(fù)合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物,在終止液(2M硫酸)作用下,最終轉(zhuǎn)化為黃色,在酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)上測(cè)定吸光度(OD值),吸光度(OD值)與待測(cè)樣品中小鼠Krueppel樣因子6(KLF6)的濃度正相關(guān)。擬合校準(zhǔn)品曲線,可以計(jì)算出樣本中小鼠Krueppel樣因子6(KLF6)的濃度。
特異性 本試劑盒識(shí)別天然和重組小鼠Krueppel樣因子6(KLF6),與結(jié)構(gòu)類似物無(wú)交叉。
重復(fù)性 板內(nèi)變異系數(shù)均<10%,板間變異系數(shù)均<15%。
回收率 回收率在 85%-115%之間。
試驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材 1、酶標(biāo)儀(450nm)
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml 量筒
操作程序 所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫,標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品,建議做復(fù)孔。
1、按前面說明書描述的方法,配制好試劑盒各種組分的工作液。
2、從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
3、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、0值孔、空白孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,0值孔加樣本稀釋液50μL,空白孔不加;血清/血漿:樣本孔中加入待測(cè)樣本 10 μL+40μL樣本稀釋液(相當(dāng)于稀釋5倍,根據(jù)情況可改變稀釋倍數(shù));其他類型樣本:樣本孔中加入待測(cè)樣本 50 μL(建議做預(yù)實(shí)驗(yàn))
4、除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔、0值孔和樣本孔,加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL。
5、用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱避光孵育60min。
6、揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置20S,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)5次。若使用自動(dòng)洗板機(jī),請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板,添加浸泡30s的程序,可以提高檢測(cè)的精度。洗板結(jié)束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應(yīng)板。
7、將底物A和B按1:1體積充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板,37℃水浴鍋或恒溫箱避光孵育15min。
8、所有孔加入終止液50μL,在酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)上讀取各孔吸光度(OD值)。
注意事項(xiàng) 1:如果試劑盒的組份需要再次使用,請(qǐng)確保上一次使用之后沒有被污染。
2:酶標(biāo)板單次未使用完,要謹(jǐn)記密封放到 2-8℃保存。
問題分析 ①問題描述:標(biāo)準(zhǔn)曲線差
可能原因及相應(yīng)對(duì)策:
1.試劑盒平衡時(shí)間不夠——不低于 2 個(gè)小時(shí)的室溫平衡
2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌
3.移液不精確——檢查和校正移液器
②問題描述:精密度低
可能原因及相應(yīng)對(duì)策:
1.洗滌不充分——按說明書要求充分洗滌和浸泡
2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑
3.重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模
4.加樣不精確——檢查和校正移液器
③問題描述:O.D值低
可能原因及相應(yīng)對(duì)策:
1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器,精確加入試劑
2.溫育時(shí)間不正確——保證充足的溫育時(shí)間
3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度
4.酶標(biāo)記物或底物失效——通過混合酶標(biāo)記物和底物,顏色迅速顯現(xiàn)來檢查
5.沒有加入終止液——按照說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟加入終止液
6.超出讀數(shù)時(shí)間讀數(shù)——在說明書推薦的讀數(shù)時(shí)間內(nèi)讀數(shù)
④問題描述:樣本值
可能原因及相應(yīng)對(duì)策:
1.不正確的樣本儲(chǔ)存方式——正確儲(chǔ)存樣本,使用新鮮樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)
2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法
3.待測(cè)物質(zhì)在樣本中含量低——使用新鮮樣本,重復(fù)實(shí)驗(yàn)
聲明 該試劑盒僅供研究使用,如將其用于臨床診斷或任何其他用途,我公司將不對(duì)因此產(chǎn)生的問題負(fù)責(zé),亦不承擔(dān)任何法律責(zé)任。

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