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      ELISA試劑盒檢測關(guān)于特異性顯色詳細【白介素elisa試劑盒】

      發(fā)布時(shí)間:2021/6/16 10:32:15      閱讀次數:1324

       ELISA試劑盒對于間接ELISA標本一般都要進(jìn)行稀釋,如果加樣不準就會(huì )造成誤差,尤其當稀釋倍數大時(shí),很小的絕對誤差,會(huì )導致較大的相對誤差,使陰性(或弱陽(yáng)性)標本呈陽(yáng)性(或陰性).加樣時(shí)應將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡.目前,大部分血站都已使用全自動(dòng)酶免加樣系統處理標本,可較好地避免以上誤差.

      在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復結果的關(guān)健一步,ELISA試劑盒應引起操作者重視.無(wú)論是手工操作還是機器操作,得出不正確的結果常與不正確的洗滌有關(guān),ELISA就是靠洗滌來(lái)達到分離游離和結合的酶標記物的目的.通過(guò)洗滌以消除殘留在板孔中沒(méi)能與固體抗原或抗體結合的物質(zhì),以及在反應過(guò)程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì).

      每種試劑都有其最佳反應模式,其中溫度和溫育時(shí)間控制是重要因素.因孵育溫度高,反應時(shí)間長(cháng),會(huì )造成整板本底高,陽(yáng)性率高.溫育一般用濕盒或水浴,ELISA試劑盒反應板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發(fā),板上應加蓋.

      作為記錄測定結果的儀器,酶標儀的性能穩定與否,決定結果的可靠度.首先酶標儀應定期進(jìn)行保養,對濾光片要定期校正;其次酶標儀波長(cháng)設置要正確,最好使用雙波長(cháng),一個(gè)檢測波長(cháng),一個(gè)參比波長(cháng),以消除微孔板底部劃痕 不平 指印或液面高度差異造成的光干擾.此外,在用酶標儀讀數時(shí)最好先擦試微孔板底部并壓平板條.由于各種酶標儀性能有所不同,使用中應詳細閱讀說(shuō)明書(shū)

      ELISA試劑盒綜上所述,盡管目前國際上以及我國有了部分標準血清或參比血清(血清盤(pán)),但是酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)目前在技術(shù)上尚未做到標準化.受方法學(xué)及技術(shù)條件的限制,在酶聯(lián)免疫吸附測定中有時(shí)不可避免的會(huì )出現一定的非特異性,ELISA試劑盒我們可以通過(guò)以上措施把非特異性顯色降至最低限底,從而提高檢測的特異性,并得到更準確 可靠的實(shí)驗結果.

      酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)自問(wèn)世以來(lái),以其敏感性高,特異性強,操作簡(jiǎn)便 安全,開(kāi)創(chuàng )了免疫學(xué)診斷的新紀元在臨床診斷方面得到了廣泛的應用.但是ELISA試劑盒在它的研究 生產(chǎn)及使用中常常會(huì )碰到非特異性顯色問(wèn)題,ELISA試劑盒特異性 檢驗標本中含酶標記物的干擾物,操作不當等因素都會(huì )導致這樣的結果.本文就在實(shí)驗過(guò)程中產(chǎn)生的一些原因及如何采取一些措施,消除非特異性顯色作以分析.

      風(fēng)濕因子(RF) 黃疸等,類(lèi)風(fēng)濕因子是可作用于多種動(dòng)物以及人IgGFc段的自身抗體,多數為IgM類(lèi),能充當抗原成分與固相及酶標抗體反應,從而呈現非特異性顯色.

      黃疸血標本中常含有內源性過(guò)氧化物酶,如用辣根過(guò)氧化物酶為標記物,就有可能產(chǎn)生非特異性顯色.

      常因樣品采集 貯存 處理不當造成如樣品溶血,被細菌污染,標本凝集不全等.溶血標本,紅細胞溶解破裂,釋放紅素形成,而血紅素中的鐵卟啉是過(guò)氧化物酶的類(lèi)似物,以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會(huì )增加非特異性顯色.如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP(辣根過(guò)氧化酶),ELISA試劑盒有國內報道酶免HBsAg試劑檢測溶血標本時(shí)可造成假陽(yáng)性.如在冰箱中保存過(guò)久,其中的IgG可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深.因此,血標本在采集處理時(shí)應小心,在冰箱中保存不易過(guò)久.

      ELISA試劑盒標本凝集不全時(shí),血清中會(huì )殘留部分纖維蛋白原,也易造成假陽(yáng)性.

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