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      ELISA的四種檢測方法?【白介素elisa試劑盒】

      發布時間:2021/5/25 11:54:17      閱讀次數:992

       ELISA常用的四種方法

      1.直接法測定抗原

      將抗原吸附在載體表面;

      加酶標抗體,形成抗原-抗體復合物;

      加底物.底物的降解量=抗原量.

      2.間接法測定抗體

      將抗原吸附于固相載體表面;

      加抗體, 形成抗原-抗體復合物;

      加酶標抗體;

      加底物. 測定底物的降解量=抗體量.

      3.雙抗體夾心法測定抗原

      將抗原免疫第一種動物獲得的抗體吸附于固相表面;

      加抗原,形成抗原-抗體復合物;

      加抗原免疫第二種動物獲得的抗體,形成抗體抗原抗體復合物;

      加酶標抗抗體(第二種動物抗體的抗體);

      加底物.底物的降解量=抗原量.

      4. 競爭法測定抗原

      將抗體吸附在固相載體表面;

      (1) 加進酶標抗原;

      (2),(3)加進酶標抗原和待測抗原;

      加底物.對照孔與樣品孔底物降解量的差=未知抗原量.

      三.儀器和材料

      1. 聚苯乙烯微量細胞培養板(平板, 40, 96孔).

      2. 酶聯免疫檢測儀

      3. 辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 工作稀釋度1:1000.

      4. 包被液::0.05mol/L pH9.6碳酸緩沖液,4℃,保存, Na2CO3 0.15克, NaHCO3 0.293克,蒸餾水稀釋至100 ml.

      5. 稀釋液:0.01mol/LpH7.4 PBS--Tween--20, 4℃,保存. NaCl 8g, KH2PO4 0.2g, Na2HPO4.12H2O 2.9g, Tween-20,0.5ml. 蒸餾水加至1000ml.

      6. 洗滌液:同稀釋液

      7. 封閉液:0.5%雞卵清蛋白,pH7.4 PBS.

      8. 鄰苯二胺溶液(底物):臨用前配制 0.1M 檸檬酸(2.1g/100ml), 6.1ml 0.2M Na2HPO4.12H2O (7.163g/100ml) 6.4ml, 蒸餾水12.5ml, 鄰苯二胺10mg, 溶解后, 臨用前加30%H2O2 40 微升.

      9. 終止液:2mol/LH2SO4.

      四. 操縱步驟

      1. 包被抗原:用包被液將抗原作適當稀釋, 一般為1~10微克/孔,每孔加200微升,37℃溫育1小時后,4℃冰箱放置16~18小時.

      2. 洗滌:倒盡板孔中液體,加滿洗滌液,靜放三分鐘,反復三次,最后將反應板顛倒在吸水紙上,使孔中洗滌液流盡.

      3. 加封閉液200微升,37℃放置一小時.

      4. 洗滌同2.

      5. 加被檢血清:用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,,每孔200微升.同時作稀釋液對照.37℃放置2小時.

      6. 洗滌同2.

      7. 加辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時.

      8. 洗滌同2.

      9. 加底物:鄰苯二胺溶液加200ml,室溫暗處10--15分鐘.

      10. 加終止液:每孔50微升.

      11. 觀察結果:用酶聯免疫檢測儀記錄450nm讀數.

      泉州市睿信生物科技有限公司會定期發布新品推薦和產品規格參數.公司主要經營:elisa試劑盒 大鼠/小鼠/牛/羊/犬elisa試劑盒 人elisa試劑盒 胰島素/白介素/白細胞介素elisa試劑盒等產品.歡迎來電咨詢產品,新聞轉自網絡,如果有內容侵權請聯系本公司,會及時做出刪除處理,謝謝!ELISA常用的四種方法

      1.直接法測定抗原

      將抗原吸附在載體表面;

      加酶標抗體,形成抗原-抗體復合物;

      加底物.底物的降解量=抗原量.

      2.間接法測定抗體

      將抗原吸附于固相載體表面;

      加抗體, 形成抗原-抗體復合物;

      加酶標抗體;

      加底物. 測定底物的降解量=抗體量.

      3.雙抗體夾心法測定抗原

      將抗原免疫第一種動物獲得的抗體吸附于固相表面;

      加抗原,形成抗原-抗體復合物;

      加抗原免疫第二種動物獲得的抗體,形成抗體抗原抗體復合物;

      加酶標抗抗體(第二種動物抗體的抗體);

      加底物.底物的降解量=抗原量.

      4. 競爭法測定抗原

      將抗體吸附在固相載體表面;

      (1) 加進酶標抗原;

      (2),(3)加進酶標抗原和待測抗原;

      加底物.對照孔與樣品孔底物降解量的差=未知抗原量.

      三.儀器和材料

      1. 聚苯乙烯微量細胞培養板(平板, 40, 96孔).

      2. 酶聯免疫檢測儀

      3. 辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 工作稀釋度1:1000.

      4. 包被液::0.05mol/L pH9.6碳酸緩沖液,4℃,保存, Na2CO3 0.15克, NaHCO3 0.293克,蒸餾水稀釋至100 ml.

      5. 稀釋液:0.01mol/LpH7.4 PBS--Tween--20, 4℃,保存. NaCl 8g, KH2PO4 0.2g, Na2HPO4.12H2O 2.9g, Tween-20,0.5ml. 蒸餾水加至1000ml.

      6. 洗滌液:同稀釋液

      7. 封閉液:0.5%雞卵清蛋白,pH7.4 PBS.

      8. 鄰苯二胺溶液(底物):臨用前配制 0.1M 檸檬酸(2.1g/100ml), 6.1ml 0.2M Na2HPO4.12H2O (7.163g/100ml) 6.4ml, 蒸餾水12.5ml, 鄰苯二胺10mg, 溶解后, 臨用前加30%H2O2 40 微升.

      9. 終止液:2mol/LH2SO4.

      四. 操縱步驟

      1. 包被抗原:用包被液將抗原作適當稀釋, 一般為1~10微克/孔,每孔加200微升,37℃溫育1小時后,4℃冰箱放置16~18小時.

      2. 洗滌:倒盡板孔中液體,加滿洗滌液,靜放三分鐘,反復三次,最后將反應板顛倒在吸水紙上,使孔中洗滌液流盡.

      3. 加封閉液200微升,37℃放置一小時.

      4. 洗滌同2.

      5. 加被檢血清:用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋,,每孔200微升.同時作稀釋液對照.37℃放置2小時.

      6. 洗滌同2.

      7. 加辣根過氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小時.

      8. 洗滌同2.

      9. 加底物:鄰苯二胺溶液加200ml,室溫暗處10--15分鐘.

      10. 加終止液:每孔50微升.

      11. 觀察結果:用酶聯免疫檢測儀記錄450nm讀數.

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