ELISA試驗(yàn)常見問題

發(fā)布時(shí)間：2025/8/13 9:06:15 閱讀次數(shù)：0

1、ELISA試驗(yàn)出現(xiàn)非常弱的結(jié)果，常見有7種原因，其解決方法如下：

1)可能原因：溫育的時(shí)間或者溫度不夠；

解決方法：校正溫育箱溫度。

2)可能原因：顯色反應(yīng)時(shí)間太短；

解決方法：校正定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)。

3)可能原因：所用配制緩沖液的蒸餾水有問題；解決方法：使用新鮮合格的蒸餾水。

4)可能原因：加入抗體/酶的稀釋液濃度太低；

解決方法：按照說明書保存試劑盒和準(zhǔn)確配制工作液。校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時(shí)要緊密。

5)可能原因：酶標(biāo)儀濾光片不正確；

解決方法：檢查酶標(biāo)儀使用的濾光片。

6)可能原因：試劑盒沒有充分平衡；

解決方法：試劑室溫平衡至少120分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫。

7)可能原因：不正確的試劑儲(chǔ)存方式；

解決方法：按照說明書要求保存試劑盒。

2、試驗(yàn)結(jié)果白板，而且陽性對(duì)照不顯色，應(yīng)如何分析和查找原因?

答：試驗(yàn)結(jié)果白板，而且陽性對(duì)照不顯色，常見原因如下：

a)可能原因：漏加或者誤加試劑；

解決方法：檢查試驗(yàn)記錄和剩余試劑。每次加液前均應(yīng)核對(duì)標(biāo)簽。

b)可能原因：試劑過期；

解決方法：使用有效期內(nèi)的產(chǎn)品。

c)可能原因：洗板液配制中出現(xiàn)問題，如量筒不干凈

含HRP酶抑制物(疊氮鈉等);

解決方法：使用干凈的器皿，正確配制試劑。

d)可能原因：溫育的時(shí)間或溫度不夠；

解決方法：校正溫育箱溫度。

e)可能原因：標(biāo)準(zhǔn)品失活或者丟失；

解決方法：標(biāo)準(zhǔn)品正確保存、溶解和混勻。

f)可能原因：抗體失活或者丟失；

解決方法：更換抗體或者提高抗體濃度。

g)可能原因：酶失活或者丟失

檢查方法：把工作濃度的酶再稀釋20-100倍，取5uL加入100ul的顯色液A和B混合底物，終止后顯色是否能達(dá)到1.0左右，此為酶的粗略估計(jì)。

解決方法：更換酶或者提高酶的濃度。

h)可能原因：顯色底物失活

檢查方法：加少量的工作濃度的酶，TMB是否很快顯色。

解決辦法：更換顯色底物。

3、試驗(yàn)結(jié)果空白背景高，這是什么原因造成的?

答：試驗(yàn)結(jié)果空白背景高，常見原因如下：

a)可能原因：洗板不干凈；

解決方法：充分洗滌，徹底拍干；洗板要防止交叉污染；濃縮洗液準(zhǔn)確配制；吸嘴盡可能一次性使用；加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染。

b)可能原因：顯色液變質(zhì)或者試劑過期；

解決方法：檢查試劑盒有效期。

c)可能原因：蒸餾水受酶等污染；

解決方法：使用新鮮蒸餾水；

d)可能原因：試劑混用；

解決方法：不同批號(hào)試劑勿混用。

e)可能原因：培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)。

解決方法：顯色反應(yīng)時(shí)間適當(dāng)縮短。

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