發(fā)布時間：2025/8/13 9:04:26 閱讀次數(shù)：0
1、固相載體選擇
聚苯乙烯：具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學活性。
聚氯乙烯：聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。
良好的ELISA板應該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間性能相近。
2、包被
①板孔的選擇：ELISA級別的微孔板；
②抗體選擇：選擇支持ELISA實驗的抗體，根據(jù)推薦濃度稀釋或摸索最適濃度；
③包被緩沖液：pH7.2磷酸鹽緩沖液；
④包被溫度：2-8℃過夜包被或室溫(37℃)包被2h;
⑤包被濃度：包被濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化。一般包被濃度為1ug/ml-2ug/ml
3、封閉
①包被之后一定要立即封閉(封閉非特異性抗體);
②選擇效果較好的封閉劑(細胞培養(yǎng)級BSA、Tween等)。
4、加樣及孵育
①加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡；
②孵育的時間及溫度參考試劑盒說明書。如有條件，建議加樣孵育時使用shaker震蕩儀，推薦軌道直徑3mm,轉(zhuǎn)速在500±50rpm;
③檢測抗體、酶標物的稀釋比例、孵育溫度、孵育時間嚴格根據(jù)說明書提示；
④洗板對于ELISA來說，是極其關(guān)鍵的一步，保證ELISA的特異性；
⑤封板膜一定要一次一換，切勿二次甚至多次使用，以防交叉污染。
5、顯色和終止
①使用前需檢查，底物在加入96孔板之前應為無色透明；
②顯色底物需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免污染；
③孵育時間，說明書上為參考范圍，具體需要根據(jù)實驗條件自行摸索�？蓞⒖紭饲鷿舛茸畲罂椎念伾�?yōu)樗{色較明顯時即可。
聯(lián)系我們
服務熱線
掃一掃，加微信客服
版權(quán)所有：泉州市睿信生物科技有限公司 | 閩ICP備18019542號 | 技術(shù)支持：阿儀網(wǎng)
